间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
1. 包被抗原：按每孔加入100µl抗原和包被稀释液包被酶标板 ，4℃过夜或37℃孵育2小时。
2. 洗板：倒掉包被液，用洗液洗孔3次，拍干。
3. 封闭酶标板：每孔加入封闭液200µl, 37℃封闭1小时。
4. 洗板：倒掉封闭液，用洗液洗孔3次，拍干。
5. 加入待测一抗：每孔加100µl抗体，在A行中加入20µl对应的待测样品，按计划图做比稀释，37℃孵育1小时。
6. 洗板：倒掉待测一抗，用洗液洗孔6次。
7. 加入酶标二抗：每孔加入稀释的酶标二抗100µl，37℃孵育1小时。
8. 洗板：倒掉酶标二抗，用洗液洗孔6次。
9. 配置显色液：将显色液A，B，C按5:4:1的比例混合。
10. 加入显色液：每孔加入100µl显色液，置37℃避光显色15-30分钟。
11. 终止反应：当阳性对照出现明显颜色变化后而阴性孔没有颜色反应时，每孔加入终止液50µl，20分钟内测定结果。
12. 酶标仪测定结果：OD450nm读数。 |
