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IHC Protocol for Paraffin Embedded Tissues
2007-12-19 21:28:14
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  石蜡切片免疫组化染色方法

  1. 二甲苯脱蜡7分钟×3次,无水乙醇3分钟×2次,95%-80%乙醇4各5分钟,自来水5分钟,蒸馏水5分钟。
  2. 将微波修复液(0.01M pH 6.0 柠檬酸缓冲液)加热至沸腾,再将切片置入,用微火处理10分钟,自然冷却至室温。
  3. 3%双氧水处理10分钟。
  4. 10%羊血清封闭,每张切片滴加100ml,湿盒中37℃ 30分钟。
  5. 倾去血清,勿洗。每张切片滴加100 ml用0.01M PBS稀释的一抗(终浓度4µg/ml),湿盒中室温放置10分钟后,4℃过夜。
  6. 0.01M PBS清洗,5分钟×3次,每张切片滴加100 ml以0.01M PBS(含1%BSA)1:200稀释的二抗,湿盒中37℃ 30分钟。
  7. 0.01M PBS清洗,5分钟×3次,每张切片滴加100ml以0.01M PBS 1:200稀释的三抗,湿盒中37℃ 30分钟。
  8. 1%DAB显色,5-10分钟,镜下控制显色时间,自来水终止显色反应。在DAB显色时,若滴加显色液后所有组织迅速显色,可终止反应。
  9. 苏木素复染2分钟。
  10. 1%盐酸水溶液分化30秒。
  11. 自来水复蓝20分钟。
  12. 70-80-90-95-100-100%梯度浓度酒精脱水,各5分钟,二甲苯透明5分钟*2。
  13. 中性树胶封片。
  14. 显微镜观察组织细胞是否有阳性反应。

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