·制备细胞裂解液：
　　离心细胞，用PBS悬浮离心下来的细胞团，使细胞悬液的终浓度为3×106个细胞/毫升。这对于多数细胞来说是适合的，但是有时对于不同细胞（比如蛋白含量不同） 有必要做一些调整。按照实验要求或者产品说明书，在适合的还原或者非还原样品缓冲液终制备细胞裂解液。在有些情况下，如果用单克隆抗体检测抗原蛋白，还原剂可能会破坏抗原蛋白构像，对实验造成干扰。将细胞悬浮液与等体积的非还原性的2×SDS上样缓冲液（6% SDS, 0.25 M Tris, pH 6.8, 10% 甘油，和溴酚蓝）混合，或者用还原行的2×SDS上样缓冲液（还原性缓冲液加20 mM DTT）。超声细胞8－10次，每次2－3秒以打断DNA。

　　·免疫印记操作规程：
　　1. 上样，并在合适浓度的SDS-PAGE凝胶中分离白。
　　2. 将分离的蛋白转移到PVDF膜上，室温下用封闭液（1×PBS, pH 7.4 含5%脱脂奶粉）孵育1小时或者4℃过夜。
　　3. 在室温下用PBST洗膜，5×5分钟。
　　4. 用包含合适浓度（见抗体说明书）一抗的杂交缓冲液（1×PBS, pH 7.4 含5%脱脂奶粉）在室温下孵育2小时，或者4℃过夜。
　　5. 室温下洗膜5×5分钟。
　　6. 用含有合适浓度酶标二抗（比如羊抗兔IgG -HRP）的杂交缓冲液在室温下孵育膜1小时。
　　7. 室温下洗膜5×5分钟。
　　8. 用发光试剂检测杂交信号。

　　抗体的最佳工作浓度最终决定于不同实验室的不同用途。